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液相色谱仪使用的技术特点
发布时间:2019-08-23   点击次数:151次
     液相色谱仪只需要将样品制成溶液,不受样品挥发性的影响。流动相选择范围广,固定相数量多,可以分离出热不稳定、不挥发、不离解、分子量范围多样的材料。
 
    在LC液相色谱分析检测样品过程中,色谱柱会受到样品和色谱系统的污染,导致色谱柱耐久性差,使用寿命短。
 
    色谱系统污染主要是指LC液相色谱系统中组分磨损产生的固体颗粒,以及流动相系统没有完全过滤的固体颗粒。样品污染主要是指未完全溶解或已完全溶解的样品进入色谱系统。由于样品溶剂和流动相溶剂的溶解度不同,被污染的体系被析出。特别是对中药、天然产物、合成中间体和生物药物的检测,由于基质的复杂性,色谱柱的污染将更加严重。污染会导致色谱系统压力升高、色谱柱塌陷、填料变色,从而带来检测成本高、检测结果不准确等影响。
 
    液相色谱法的发展是一个复杂的过程,但无论多么复杂,也有自己的规律。在方法开发过程中,一般的原则是找到目标化合物的峰,然后调整峰形,再进一步改进。
 
    光谱上的内容主要包括:色谱柱、波长、流动相、温度、流速和注射量。这意味着如果确定了这些色谱条件,基本上可以认为该方法已经开发成功,所以我们可以通过对这些色谱条件进行逐一检查来开发该方法。
 
    色谱条件的检验是通过色谱中的样品来进行的,这就要求我们首先建立一个初始条件,即回答从哪里开始的问题。在回答“从哪里开始”这个问题之前,我们需要了解我们的分析对象,就像一场战争,我们需要知道我们的敌人是谁,我们需要了解它的物理和化学性质,尤其是化学结构公式是非常关键的。
 
    液相色谱仪与样品预处理技术相结合,具有较高的分辨率和灵敏度,使分离和同时测定性质非常相似的物质成为可能,并可在复杂相中分离痕量成分。随着固定相的发展,有可能在足够的条件下分离生物化学物质以保持其活性。
 
    为液相色谱仪的注射口和检测器类型选择柱尺寸和垫片材料;避免重复使用气相色谱仪垫圈;使用合适的刀具(如陶瓷板或金刚石刀)切割立柱;安装进气口和检测器前,确保气相色谱柱清洁平整。应制造商要求安装气相色谱仪,并在进气口与检测器之间的适当距离插入色谱柱;气柱必须置于柱上,毛细管柱的任何部分不得接触柱壁。确保烘箱内所有接头在加热前是水密的,载气中无氧;通过注射检查LC柱安装是否正确,不要保留化合物或使用气相色谱仪软件程序,并设置载气线性流量。
 
   液相色谱仪要求
 
    1、 使用前,流动相必须用高效液相色谱级试剂进行过滤,去除颗粒杂质和其他物质(过滤膜为0、45m或更细)。
 
    2、 流动相过滤后采用超声波除气。脱气后在室温下使用。
 
    3、纯乙腈不能作为流动相,会导致单向阀卡住,阻止泵进入液体。
 
    4、 使用缓冲液时,样品完成后立即用去离子水冲洗管道和柱1小时,然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,使离子完全去除。对于柱塞棒的外部,样品完成后也必须用20mL以上的去离子水冲洗。
 
    5、 不要长时间使用这个仪器。拆下立柱,用插头密封。注意,由于长霉,钢瓶不应存放在纯水中,而应存放在有机相中(如甲醇等)。
 
    6、 用高效液相色谱法测定样品后,用样品中溶解的溶剂清洗取样器。
 
    7、 C18柱不能用于蛋白质样品、血液样品和生物样品。
 
    8、 如因堵塞造成压力过高,可在混合器管道的过滤器单向阀内使用预柱式过滤器进行检查和清洗。清洗方法:
 
    9、 气泡会造成不稳定的压力和较差的重现性,所以在使用过程中尽量避免气泡。
 
    10、 液相色谱仪如果液管中没有液体,LC液相色谱仪应使用注射器吸液:注射前应清洗流动相。
 
    11、 注意色谱柱的pH值范围。不要注入强酸或碱性样品,特别是碱性样品。
 
    12、 更换移动相时,滤头应放置在烧杯内,振动时清洗干净,再插入新的移动相。不混相流动转化为异丙醇。
 
    高效液相色谱系统由储液器、泵、采样器、色谱柱、检测器和记录仪组成。流动相的蓄电池是高压泵入系统,样品溶液为流动相,取样器是流动相在色谱柱(固定相),因为各种组件的示例解决方案两个阶段有不同的分配系数,相对运动的两个阶段,经过几次的吸附-解吸过程,组件在移动速度的分布有很大的差异,将逸出的成分从柱中分离出来,通过检测器,将样品浓度转换成电信号发送到记录仪,数据以地图的形式打印出来。
 
    液相色谱仪的工作原理是流动相累加器是高压泵入系统,样品溶液为流动相,取样器是流动相在色谱柱(固定相),因为各种组件的示例解决方案两个阶段有不同的分配系数,相对运动的两个阶段,经过几次的吸附-解吸过程中,各组分的分布在运动速度上有很大差别,逸出的组分在色谱柱中分离,通过检测器,将样品浓度转换成电信号发送到记录仪,数据以地图的形式打印出来。
 
    LC液相色谱仪不适合温度环境。正常情况下,在5 ~ 35℃的室温下即可满足使用要求。一般来说,湿度环境需要在20%到85%之间。在高湿度地区,使用某些类型的气相色谱仪时,由于环境湿度高,会降低气相色谱仪的绝缘性能,工作灵敏度高时响应值也会降低。员工在使用气相色谱仪时,遇到上述现象应采取必要的措施。只需要将样品制成溶液,不受样品挥发性的影响。流动相选择范围广,固定相数量多,可以分离出热不稳定、不挥发、不离解、分子量范围多样的材料。
 
    在LC液相色谱分析检测样品过程中,色谱柱会受到样品和色谱系统的污染,导致色谱柱耐久性差,使用寿命短。
 
    色谱系统污染主要是指LC液相色谱系统中组分磨损产生的固体颗粒,以及流动相系统没有完全过滤的固体颗粒。样品污染主要是指未完全溶解或已完全溶解的样品进入色谱系统。由于样品溶剂和流动相溶剂的溶解度不同,被污染的体系被析出。特别是对中药、天然产物、合成中间体和生物药物的检测,由于基质的复杂性,色谱柱的污染将更加严重。污染会导致色谱系统压力升高、色谱柱塌陷、填料变色,从而带来检测成本高、检测结果不准确等影响。
 
    液相色谱仪的发展是一个复杂的过程,但无论多么复杂,也有自己的规律。在方法开发过程中,一般的原则是找到目标化合物的峰,然后调整峰形,再进一步改进。
 
    光谱上的内容主要包括:色谱柱、波长、流动相、温度、流速和注射量。这意味着如果确定了这些色谱条件,基本上可以认为该方法已经开发成功,所以我们可以通过对这些色谱条件进行逐一检查来开发该方法。
 
    色谱条件的检验是通过色谱中的样品来进行的,这就要求我们首先建立一个初始条件,即回答从哪里开始的问题。在回答“从哪里开始”这个问题之前,我们需要了解我们的分析对象,就像一场战争,我们需要知道我们的敌人是谁,我们需要了解它的物理和化学性质,尤其是化学结构公式是非常关键的。
 
    高效液相色谱与样品预处理技术相结合,具有较高的分辨率和灵敏度,使分离和同时测定性质非常相似的物质成为可能,并可在复杂相中分离痕量成分。随着固定相的发展,有可能在足够的条件下分离生物化学物质以保持其活性。
 
    为液相色谱仪的注射口和检测器类型选择柱尺寸和垫片材料;避免重复使用气相色谱仪垫圈;使用合适的刀具(如陶瓷板或金刚石刀)切割立柱;安装进气口和检测器前,确保气相色谱柱清洁平整。应制造商要求安装气相色谱仪,并在进气口与检测器之间的适当距离插入色谱柱;气柱必须置于柱上,毛细管柱的任何部分不得接触柱壁。确保烘箱内所有接头在加热前是水密的,载气中无氧;通过注射检查LC柱安装是否正确,不要保留化合物或使用气相色谱仪软件程序,并设置载气线性流量。
 
    液相色谱仪要求
 
    1、 使用前,流动相必须用高效液相色谱级试剂进行过滤,去除颗粒杂质和其他物质(过滤膜为0、45m或更细)。
 
    2、 流动相过滤后采用超声波除气。脱气后在室温下使用。
 
    3、纯乙腈不能作为流动相,会导致单向阀卡住,阻止泵进入液体。
 
    4、 使用缓冲液时,样品完成后立即用去离子水冲洗管道和柱1小时,然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,使离子完全去除。对于柱塞棒的外部,样品完成后也必须用20mL以上的去离子水冲洗。
 
    5、 不要长时间使用这个仪器。拆下立柱,用插头密封。注意,由于长霉,钢瓶不应存放在纯水中,而应存放在有机相中(如甲醇等)。
 
    6、 用高效液相色谱法测定样品后,用样品中溶解的溶剂清洗取样器。
 
    7、 C18柱不能用于蛋白质样品、血液样品和生物样品。
 
    8、 如因堵塞造成压力过高,可在混合器管道的过滤器单向阀内使用预柱式过滤器进行检查和清洗。清洗方法:
 
    9、 气泡会造成不稳定的压力和较差的重现性,所以在使用过程中尽量避免气泡。
 
    10、 如果液管中没有液体,液相色谱仪应使用注射器吸液:注射前应清洗流动相。
 
    11、 注意色谱柱的pH值范围。不要注入强酸或碱性样品,特别是碱性样品。
 
    12、 更换移动相时,滤头应放置在烧杯内,振动时清洗干净,再插入新的移动相。不混相流动转化为异丙醇。
 
    高效液相色谱系统由储液器、泵、采样器、色谱柱、检测器和记录仪组成。流动相的蓄电池是高压泵入系统,样品溶液为流动相,取样器是流动相在色谱柱(固定相),因为各种组件的示例解决方案两个阶段有不同的分配系数,相对运动的两个阶段,经过几次的吸附-解吸过程,组件在移动速度的分布有很大的差异,将逸出的成分从柱中分离出来,通过检测器,将样品浓度转换成电信号发送到记录仪,数据以地图的形式打印出来。
 
    液相色谱仪的工作原理是流动相累加器是高压泵入系统,样品溶液为流动相,取样器是流动相在色谱柱(固定相),因为各种组件的示例解决方案两个阶段有不同的分配系数,相对运动的两个阶段,经过几次的吸附-解吸过程中,各组分的分布在运动速度上有很大差别,逸出的组分在色谱柱中分离,通过检测器,将样品浓度转换成电信号发送到记录仪,数据以地图的形式打印出来。
 
    液相色谱仪不适合温度环境。正常情况下,在5 ~ 35℃的室温下即可满足使用要求。一般来说,湿度环境需要在20%到85%之间。在高湿度地区,使用某些类型的气相色谱仪时,由于环境湿度高,会降低气相色谱仪的绝缘性能,工作灵敏度高时响应值也会降低。员工在使用气相色谱仪时,遇到上述现象应采取必要的措施。

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