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液相色谱仪的使用技巧分析

更新时间:2019-04-24      点击次数:1837
   液相色谱仪只需要将样品制成溶液,不受样品挥发性的限制。流动相选择范围广,固定相种类多,可以分离热不稳定不挥发、离解不离解、分子量范围多样的材料。
 
  结合样品预处理技术,液相色谱所获得的高分辨率、高灵敏度,使具有非常相似性质的物质的分离与同时测定成为可能,并使复杂相体中痕量组分的分离成为可能。随着固定相的发展,液相色谱仪有可能在足够的条件下完成生化物质的分离以保持其活性。
 
  液相色谱仪系统由储液器、泵、采样器、色谱柱、检测器和记录仪组成。累加器中的流动相是高压泵入系统,样品溶液进入流动相,取样器是流动相在色谱柱(固定相),由于各种组件的样品溶液两个阶段有不同的分配系数,相对运动的两个阶段,经过几次的吸附-解吸过程中,组件的分布在移动速度上有很大的差异,将分离出的各个组分从柱状逸出,通过检测器,将样品浓度转换成电信号发送到记录仪,数据以地图的形式打印出来。
 
  液相色谱仪的工作原理是流动相在累加器是高压泵入系统,样品溶液进入流动相,取样器是流动相在色谱柱(固定相),由于各种组件的样品溶液两个阶段有不同的分配系数,相对运动的两个阶段,经过几次的吸附-解吸过程中,各组分在移动速度上的分布有很大的差异,从逸出的色谱柱中分离出各个组分,通过检测器,将样品浓度转换成电信号发送到记录仪,数据以地图的形式打印出来。
 
  LC液相色谱仪不适合温度环境。通常,操作要求可在室温下为5 ~ 35℃才能满足。通常,湿度环境需要在20%到85%之间。在高湿度地区,当使用某些类型的气相色谱仪时,由于环境湿度高,会降低气相色谱仪的绝缘性能,如果操作灵敏度高,响应值会降低。员工在使用气相色谱仪时,遇到上述现象应采取必要的措施。
 
  液相色谱仪系统由储液器、泵、采样器、柱、检测器和记录仪组成。累加器中的流动相是高压泵入系统,样品溶液进入流动相,取样器是流动相在色谱柱(固定相),由于各种组件的样品溶液两个阶段有不同的分配系数,相对运动的两个阶段,经过几次的吸附-解吸过程中,组件的分布在移动速度上有很大的差异,LC液相色谱仪从色谱柱中分离出单独的组分,通过检测器,将样品浓度转换成电信号发送到记录仪,数据以图形的形式打印出来。液相色谱仪主要包括采样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。
 
  为LC液相色谱仪进样口和检测器类型选择柱尺寸和垫片材料;避免重复使用气相色谱仪垫片;使用合适的切柱工具(如陶瓷板或金刚石刀)切柱;在气相色谱柱安装进进样口和检测器之前,确保色谱柱清洁平整;应制造商要求安装气相色谱仪,并在进气口与检测器之间的适当距离插入色谱柱;气相色谱柱必须置于色谱柱上,毛细管柱的任何部分不得接触色谱柱壁。确保烘箱所有接头在加热前不漏水,载气中无氧;通过注射检查LC液相色谱柱是否安装正确,不保留化合物或使用气相色谱仪软件程序,并设置载气的线性流量。
 
  液相色谱仪的要求
 
  1、流动相在使用前必须用hplc级试剂进行过滤,以去除颗粒杂质和其他物质(用0.45 m或更细的膜过滤)。
 
  2、流动相过滤后,应采用超声波除气。脱气后应在室温下使用。
 
  3、不能使用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀卡住,导致泵无法进入液体。
 
  4、使用缓冲液时,样品完成后立即用去离子水冲洗管道和柱1小时,然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,使离子*去除。对于柱塞棒的外部,样品完成后也必须用20mL以上的去离子水冲洗。
 
  5、长时间不要使用本仪器,柱应取出并用插头密封保存。注意,由于纯水易发霉,柱体不宜用纯水保存,应使用有机相(如甲醇等)保存。
 
  6、液相色谱仪完成样品后,用样品中溶解的溶剂清洗取样器。
 
  7、C18柱不能用于蛋白质样品、血液样品和生物样品。
 
  8、如果由于堵塞造成压力过高,则在混合器管道过滤器单向阀中使用预柱过滤器进行检查和清洗。清洗方法:
 
  9、气泡会造成不稳定的压力和较差的重现性,所以在使用过程中尽量避免气泡。
 
  10、如果进液管内没有液体,LC液相色谱仪应使用注射器吸液:通常在输液前应清洗流动相。
 
  11、液相色谱仪注意液相色谱柱的pH值范围。不要注入强酸或强碱样品,特别是碱性样品。
 
  12、更换移动相时,吸滤头应放置在烧杯内,振动时清洗,然后插入新的移动相。非混相流动相应改为异丙醇。